SDT Lysis Buffer【保存条件】4℃保存,有效期 6 个月。-20℃保存,有效期 1 年。【概述】SDT 裂解缓冲液用于裂解哺乳动物细胞和组织。其含有 SDS、Tris-HCl、DTT,对样本全蛋白有很好的提取效果。 但其中所含的 SDS 会使蛋白质变性失活,因此不适合后续活性相关实验。试剂请于避光保存,以确保其稳定性。【使用建议】1. 取 100mg 动物组织或细胞(组织提前剪成小块)加入 500μl PBS 溶液中初步匀浆(60 Hz,45s),再加入 500μl SDT 裂解液。2. 将上一步加有 SDT 裂解液的动物组织或细胞于 4℃进行匀浆(60 Hz,20s)。3. 低速短暂离心将管壁液体离下,后置于沸水浴(或 100℃)3min。4. 再次使用探头超声:40-50W 超声 5s,间隔 5s,一共 6 个循环。5. 将溶液置于沸水浴(或 100℃)2min,10000g 离心 10min。6. 收集上清进行后续实验。【注意事项】1. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。2. 该试剂仅用于科研领域,不得用于临床诊断或其他用途。3. SDT 裂解液不适用于后续做与活性相关的实验,如免疫共沉淀。在进行蛋白质浓度测定时由于 SDT 裂解液中含有 SDS 和 DTT,因此 Bradford 法和 BCA 方法不适用,而应选择去垢剂和还原剂均兼容的荧光法测定蛋白质浓度。各种裂解液中含有的去垢剂均会影响胰蛋白酶活性,并且对质谱分析产生很大影响,因此均需要在蛋白质样品酶解前除去。4. SDT 裂解液中含有较高浓度的 SDS,在低温下可能析出为正常现象,使用前只需将溶液置于 37℃加热5-10min 或至溶解即可。
0.1% Acetic Acid Solution【保存条件】室温保存,有效期 1 年【概述】乙酸,也叫醋酸、冰醋酸,化学式 CH3COOH,CAS 号 64-19-7,其水溶液为弱酸性且腐蚀性强,蒸汽对眼和鼻有刺激性作用。该产品为 0.1% 乙酸水溶液,常用作染色液催化剂或其他辅助材料,需密封保存。【注意事项】1. 本产品对人体有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Evans Blue Stain Solution 5%【保存条件】室温保存,有效期 1 年【概述】伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝,分子式 C34H24N6Na4O14S4,分子量为 960.80,CAS号为 314-13-6。伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂,因其分子量大小和血浆白蛋白相近,而且在血液中和血浆白蛋白有很高的亲和力,因此在神经科学研究中常被用于示踪观察血脑屏障(BBB)的完整性,也用于细胞染色区分活细胞、死细胞,亦可测定血容量。伊文思蓝和台盼蓝都是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。伊文思蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量,其中 0.5%为最常用的浓度。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色,因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞和活细胞,但无法区分死亡和坏死。【使用建议】(一)血脑屏障通透性1. 取处理后的实验动物(以小鼠为例),静脉注射 0.5%伊文思蓝染色液(可用 PBS 对产品进行 10倍稀释)数秒至 1 分钟,小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5~1h 后处死小鼠,取目的脑组织。2. 脑组织置于 1.5ml 离心管中,加入 1ml PBS, 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆,离心。3. 取上清,加入等量三氯乙酸,4℃孵育 18~24h。该步骤亦可采用如下操作: 取上清,按上清:丙酮=3:7 比例加入丙酮,室温孵育 24h。4.1000g 离心 20~30 min 或 2000g 离心 15min。5. 取上述溶液 1~2ml,用分光光度计测 620 nm 处吸光值(OD 值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的 OD 值,绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含量。(二)活细胞染色1、取 100μl 重悬细胞到常规 1.5ml 或 0.5ml 离心管内,加入 100μl 0.5%伊文思蓝染液(可用PBS 对产品进行 10 倍稀释)轻轻混匀,染色 3min(染色时间可适当延长,但不宜超过 10min)。2、吸取少量经过染色后的细胞,用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量,每个细胞样品至少数 500 个细胞,数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下: 细胞存活率=(细胞总数-蓝色细胞数)/细胞总数×100%【注意事项】1. 伊文思蓝对人体有轻微毒性,请小心防护。2. 细胞染色时,注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。3. 血脑屏障通透性实验中,伊文思蓝染色液注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。4. 最好采用低温冷冻离心机进行离心。5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Evans Blue Stain Solution 0.5% 【保存条件】 室温保存,有效期 1 年 【概述】 伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝,分子式 C34H24N6Na4O14S4,分子量为 960.80,CAS 号为 314-13-6。伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂,因其分子量大小和血浆白蛋白相近, 而且在血液中和血浆白蛋白有很高的亲和力,因此在神经科学研究中常被用于示踪观察血脑 屏障(BBB)的完整性,也用于细胞染色区分活细胞、死细胞,亦可测定血容量。 伊文思蓝和台盼蓝都是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活 细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。伊文思蓝染色后,通过显微镜下直接计数 或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量,其中 0.5%为最常用的 浓度。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色,因此可以通过此方法在显微镜下区分死 细胞和活细胞,但无法区分死亡和坏死。 【使用建议】 (一)血脑屏障通透性 1. 取处理后的实验动物(以小鼠为例),静脉注射 0.5%伊文思蓝染色液(可用 PBS 对产品进行 10 倍稀释)数秒至 1 分钟,小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5~1h 后处死小鼠,取目的脑组织。 2. 脑组织置于 1.5ml 离心管中,加入 1ml PBS, 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆,离心。 3. 取上清,加入等量三氯乙酸,4℃孵育 18~24h。该步骤亦可采用如下操作: 取上清,按上 清:丙酮=3:7 比例加入丙酮,室温孵育 24h。 4.1000g 离心 20~30 min 或 2000g 离心 15min。 5. 取上述溶液 1~2ml,用分光光度计测 620 nm 处吸光值(OD 值)。同时测定已知不同梯度的 标准依文思蓝的 OD 值,绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含 量。 (二)活细胞染色 1、取 100μl 重悬细胞到常规 1.5ml 或 0.5ml 离心管内,加入 100μl 0.5%伊文思蓝染液(可用 PBS 对产品进行 10 倍稀释)轻轻混匀,染色 3min(染色时间可适当延长,但不宜超过 10min)。 2、吸取少量经过染色后的细胞,用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量, 每个细胞样品至少数 500 个细胞,数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下: 细胞存 活率=(细胞总数-蓝色细胞数)/细胞总数×100% 【注意事项】 1. 伊文思蓝对人体有轻微毒性,请小心防护。 2. 细胞染色时,注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。 3. 血脑屏障通透性实验中,伊文思蓝染色液注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。 4. 最好采用低温冷冻离心机进行离心。 5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。